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微生物法與HPLC法測定葉酸含量方法比較

更新時間:2018-09-10  |  點擊率:1536

GB 10765-2010《嬰幼兒配方食品》中規(guī)定了葉酸可以作為嬰兒配方食品添加物。因此準確地測定葉酸的含量對嬰幼兒配方產(chǎn)品的生產(chǎn)加工、功效評價等有重要意義。維生素的檢測方法有儀器法、微生物法和基于微生物法原理的試劑盒法。微生物法是目前應用為廣泛的,也是美國*分析化學家協(xié)會的推薦方法。目前,國家標準GB 5009.211-2014《食品中葉酸的測定》和GB 5413.16-2010《嬰幼兒配方食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)測定》中對食品和嬰兒食品和乳制品中葉酸的測定均采用微生物法。

 

除微生物法以外,還可以選用液相法測定葉酸的含量。液相色譜法是利用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵人裝有填充劑的色譜柱,對供試品進行分離側定的色譜方法。注人的供試品,由流動相帶入柱內(nèi),各組分在柱內(nèi)被分離,并依次進人檢測器,由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。

 

液相法測定食品中葉酸含量操作方法和所用藥品分析相似:稱取磨細的樣品置于離心管中,加入流動相液體,超聲波提取15 min-30 min。取出后加入流動相定容,搖勻后過濾,濾液用 HPLC 法分析。

 

在有限的空間與營養(yǎng)成分條件下,微生物的生長過程會受到競爭與抑制的作用。選用微生物法測定葉酸含量時,自配的基礎培養(yǎng)基雜質含量高,建議使用HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸測定用培養(yǎng)基(貨號:M543)。培養(yǎng)基的pH值對L.C生長很重要,一般保持在pH6.8~7.2,過高過低均不利于細菌生長。測定葉酸常用的菌種酪乳酸桿菌(ATCC 7469)。為保證測定管中滴加等量的接種液,接種液可用10mL滅菌針筒吸取,水平固定于鐵架臺上輕輕旋轉推桿,滴加菌液。測定管比色前,應用混勻器將菌液搖勻后進行比色。

 

 

微生物法與液相色譜法相比較,其優(yōu)點是可以測定成分復雜樣品中的化合物形式葉酸,結果更準確;對于添加劑形式的葉酸則與HPLC法具有同樣的準確度,同時微生物法具有靈敏度高的優(yōu)點,檢測限可達到0.01ng·mL-1,而液相色譜法檢出限為10μg·mL-1,且價格便宜。但微生物法實驗周期長,每周一次的菌種傳代保藏比較繁瑣;液相色譜法的特點是測定結果準確、操作簡便、省時省力、分析速度快、分離效果好,是近年來發(fā)展速度較快的測定葉酸的方法,分析操作方法和所用藥品分析相似,適合檢測純品,但分析成本高,液相色譜儀價格及日常維護費用貴。

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