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細(xì)胞治療項(xiàng)目中,支原體檢測(cè)的必要性

更新時(shí)間:2023-10-13  |  點(diǎn)擊率:565

細(xì)胞治療是用具有活性細(xì)胞制劑為主要成分來(lái)治療或預(yù)防疾病的技術(shù),細(xì)胞治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)是干細(xì)胞和免疫細(xì)胞,應(yīng)用這些技術(shù),需要遵照相應(yīng)的法律、法規(guī)與行政管理規(guī)定,其細(xì)胞來(lái)源、生產(chǎn)工藝和臨床應(yīng)用過(guò)程進(jìn)行污染物的監(jiān)控與檢測(cè)。

 

當(dāng)細(xì)胞受到支原體污染初期,通常難以觀察到細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)方面的明顯變化。然而,如果支原體污染嚴(yán)重,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減緩,并在細(xì)胞之間形成膜片狀的附著結(jié)構(gòu)。此外,支原體的存在會(huì)抑制宿主細(xì)胞的核酸蛋白合成,影響細(xì)胞內(nèi)一些重要酶和細(xì)胞因子的正常功能。這些影響最終會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖受到抑制,甚至停止,導(dǎo)致細(xì)胞碎片逐漸增多,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

 

不僅如此,如果細(xì)胞或者細(xì)胞產(chǎn)物被支原體污染,一旦此類(lèi)藥物用于臨床,將造成不可挽回的后果。因此,在細(xì)胞治療項(xiàng)目中,需要對(duì)是否存在支原體污染進(jìn)行檢測(cè)。常用的方法為qPCR的方法。

 

支原體熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。該方法的優(yōu)點(diǎn):

①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果

③檢測(cè)結(jié)果可定量

④操作簡(jiǎn)便

 

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(均為探針?lè)z測(cè)),依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。  

此兩類(lèi)試劑盒較全球其他廠家同類(lèi)產(chǎn)品,具有以下優(yōu)點(diǎn):

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性,無(wú)交叉反應(yīng))。


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